Fluoracle® é o software operacional para o espectrofluorômetro FS5. Ele controla todos os recursos do espectrômetro de estado estacionário e resolvido no tempo do FS5 com um conceito de design simples: foco em todos os aplicativos modernos de espectroscopia de fotoluminescência e fornece uma interface amigável com saídas ‘prontas para publicação’. Independentemente de você selecionar uma versão básica de varredura espectral do FS5 ou optar por uma versão avançada que inclui medições de vida útil do TCSPC ou integração de medições de esfera, o software completo fornecerá opções de instrumentos automaticamente, desde aquisição de dados até análise e apresentação.
Atualize para o software FAST para análise avançada de vida útil de fluorescência.
Exemplos de medição
Varreduras de Emissão – com dependência de temperatura
A rodamina B, ao contrário de outros derivados da rodamina, tem uma estrutura química que não é totalmente rígida. Consequentemente, os grupos dietilamino interagem com a temperatura do solvente, afetando a população e a dinâmica do estado excitado da molécula através do movimento de torção. Isso faz com que a intensidade de fluorescência tenha uma forte dependência da temperatura da amostra, que pode ser vista abaixo, medida com o suporte de amostra resfriado TE.
Rodamina B em água, OD a 525 nm = 0,1 Largura de banda espectral: 2,5 nm, tempo de integração por ponto: 0,1 s Faixa de precisão de temperatura: 0,5ºC, Tempo de estabilização de temperatura: 10 min
Varreduras de excitação – com dependência de pH
Os espectros de excitação de fluorescência são mais seletivos que os espectros de absorção, pois revelam, em virtude do comprimento de onda de emissão selecionado, onde a molécula pode absorver fótons para produzir uma espécie emissora particular. Espectros de excitação precisos requerem um instrumento sensível, pois a concentração da amostra deve ser mantida baixa para evitar efeitos de filtro interno e requer correção espectral confiável para garantir uma representação espectral adequada.
Fluoresceína em água, com ajustes de pH 2 – 7. Largura de banda espectral: 1,5 nm, tempo de integração: 0,1 s pH ajustado entre pH= 2 (espectro deslocado para azul) e pH = 7 (espectro de intensidade máxima)
Varreduras síncronas – com dependência de concentração
Em varreduras espectrais síncronas, os monocromadores de excitação e emissão varrem ao mesmo tempo com um deslocamento de comprimento de onda fixo, normalmente de 0 a 20 nm de deslocamento pendente da aplicação. Para misturas diluídas, esse tipo de varredura é usado para identificar espécies com forte sobreposição entre absorção e emissão. Varreduras síncronas, juntamente com o acessório de esfera integradora, também podem ser usadas para medir os espectros de transmissão/refletância/absorção de pós com forte dispersão.
YAG: Ce em pó, diluído com BaSO4 para estudar o efeito de reabsorção/emissão, mudança de concentração de 100% para 20%. O assistente de software é usado para calcular a Absorbância (esquerda) a partir dos dados brutos de varreduras síncronas (direita).
Varreduras de Absorção / Varreduras Cinéticas
O FS5 pode gravar o curso de tempo de um sinal de fluorescência e, ao mesmo tempo, gravar o sinal transmitido através da amostra. Isso permite que experimentos sejam realizados com amostras quimicamente ou biologicamente instáveis, ou com amostras onde mudanças muito pequenas precisam ser medidas com muita precisão. O detector de transmissão é padrão no FS5.
Ensaio de caspase, curso de tempo de fluorescência registrado para uma adição de enzima de 100% (azul) e um controle de enzima de 0% (vermelho). A clivagem peptídica é registrada por um corante orgânico excitado a 400 nm, emitindo a 460 nm.
Mapas de Emissão de Excitação
Os mapas de emissão de excitação (EEMs) fornecem uma ‘impressão digital’ de misturas complexas de substâncias. Esses mapas são normalmente medidos por uma série de varreduras de emissão com aumento gradual, ou para mapas síncronos, por uma série de varreduras síncronas e aumento gradual do deslocamento excitação-emissão. Uma medição de mapa em uma ampla faixa de comprimentos de onda de excitação e emissão, conforme mostrado aqui, só pode ser realizada corretamente se a dispersão de ordem superior for removida automaticamente durante a medição; os filtros automáticos integrados do FS5, juntamente com a correção em tempo real para ruído de fundo e eficiências espectrais, permitem que essas medições sejam executadas perfeitamente até mesmo pelos usuários mais novos.
Medições de Lote (Modo de Lote)
Combinações de excitação, emissão, varreduras síncronas, excitação-emissão ou mapas síncronos podem ser executadas em Batch Measurements. Isso significa que várias varreduras podem ser configuradas para uma amostra e medidas automaticamente sem a presença do usuário. As varreduras podem ser configuradas para repetir em loops quantas vezes forem necessárias, com um atraso pré-definido fixo entre cada varredura. As medições de lote (protocolos) podem ser salvas e carregadas para uso futuro.
Medições de rendimento quântico de fluorescência absoluta
Os rendimentos quânticos de fluorescência podem ser medidos usando a esfera integradora opcional, montada na câmara de amostra. O método absoluto compara diretamente o número de fótons absorvidos e emitidos através da medição de uma referência em branco e uma amostra onde seus espectros podem ser integrados entre si. O cálculo do rendimento quântico é feito usando um assistente dentro do software operacional.
Bissulfato de quinina em ácido perclórico. A curva vermelha mostra a varredura sobre a dispersão de excitação em 350 nm e a emissão da amostra, a curva azul mostra a dispersão da medição em branco. A faixa de emissão da amostra e referência em branco (370 – 700 nm) foi aumentada em um fator de 100 para melhor demonstração.
Cromaticidade e Coordenadas de Cor
A indústria de iluminação exige a determinação precisa das coordenadas de cor dos pós fluorescentes. O software FS5 e Fluoracle fornece ferramentas de análise de cromaticidade para a determinação de coordenadas de cor e valores de luminosidade usando CIE 1931 e CIE 1976. O exemplo mostra quatro pós comerciais com emissão azul, verde, amarelo e vermelho.
Leitor de placas
Várias medições de amostras podem ser feitas usando o acessório porta-amostras do leitor de placas. Isso pode ser usado para amostras líquidas com placas comerciais de até 96 poços, mas também é adequado para avaliação de qualidade de rotina de pós fluorescentes. Tal como acontece com todos os acessórios do porta-amostras, também é compatível com as opções de atualização do FS5, incluindo atualizações vitalícias.